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ELISA實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn):樣本收集及保存操作不當(dāng)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
更新時(shí)間:2026-06-26瀏覽:366次

  ELISA實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn):樣本收集及保存操作不當(dāng)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  一、樣本收集不當(dāng)?shù)挠绊?/p>

  假陽(yáng)性結(jié)果?:嚴(yán)重溶血時(shí),血紅蛋白自帶過氧化物酶活性,會(huì)催化底物非特異性顯色;樣本被細(xì)菌污染,菌體含內(nèi)源性HRP,也會(huì)引發(fā)假陽(yáng)性。

  假陽(yáng)性干擾?:血液未全凝固就強(qiáng)行離心,殘留的纖維蛋白原會(huì)在孔內(nèi)形成絮狀沉淀,難以洗凈,直接造成假陽(yáng)性結(jié)果。

  結(jié)果偏差?:用含EDTA、NaN?的容器收集樣本,會(huì)抑制辣根過氧化物酶活性,導(dǎo)致顯色偏弱,出現(xiàn)假陰性。

  二、樣本保存不當(dāng)?shù)挠绊?/p>

  目標(biāo)物降解?:樣本反復(fù)凍融、長(zhǎng)期在室溫放置,會(huì)讓待測(cè)蛋白變性失活,濃度大幅降低,最終得到假陰性結(jié)果。

  非特異性升高?:4℃存放超過5天,血清中IgG會(huì)發(fā)生聚合,間接法實(shí)驗(yàn)的本底值明顯升高,干擾結(jié)果判讀。

  樣本污染變質(zhì)?:未密封存放的樣本易被交叉污染,不同批次樣本間相互干擾,大幅增加實(shí)驗(yàn)隨機(jī)誤差。

  三、規(guī)范操作要點(diǎn)

  收集環(huán)節(jié)?:血清用無(wú)熱原試管采集,室溫放置2小時(shí)待凝固后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離上清,全程避免溶血。

  保存環(huán)節(jié)?:按單次檢測(cè)用量分裝,短期2-8℃存放不超過5天,長(zhǎng)期凍存于-20℃/ -80℃,嚴(yán)格杜絕反復(fù)凍融。

  復(fù)融環(huán)節(jié)?:凍存管凍存樣本在15-25℃水浴快速?gòu)?fù)融,混勻后再次離心去除沉淀,再用于后續(xù)檢測(cè)。

  注:以上科研產(chǎn)品資料供參考!

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